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la pagina originale in inglese al seguente indirizzo http://www.isrvma.org/article/54_3_4.htm
Si tratta di una traduzione "di servizio", pertanto non molto curata,
con l'obiettivo di sensibilizzare sulla questione, in Italia pressoché
sconosciuta ai semplici appassionati.
Nelle parti più tecniche si è preferito lasciare il testo originale.
UN'INDAGINE
SU ENCEPHALITOZOON CUNICULI IN COLONIE DI CONIGLIO
IN ELAZIG, TURCHIA: PATHOMORPHOLOGIC E SEROLOGIC
STUDIES (CARBONIMMUNOASSAY TEST)
Y. Eroksuz, H. Eroksuz, H. Ozer, A. ÇCevik, O.Unver
L'università Firat, facoltà di medicina veterinaria, reparto
di patologia, 23119, Elazig, Turchia
Sommario
I centocinquanta conigli di 15 colonie diverse sono stati esaminati per encephalito-zoonosis
sia serologically (carbonimmunoassay test) che pathomorphologically. In totale,
la seropositivity era il 65.33%. Le lesioni di rene grossolane che erano formate
da depressioni subcapsular sono state osservate in 22 animali che erano anche
sieropositivi, mentre in sieronegativi non è stata rilevata tale lesione.
Microscopicamente, nonsuppurative subacuto o cronico e la nefrite granulomatous
interstizialee grave e di distribuzione variabile è stata rilevata
in 38 (il 21.33%) e in encefalite non purulenta focale granulomatous in 32
(il 25.33%), conigli sieropositivi in cui entrambe le lesioni sono state viste
26 (il 17.33%) conigli. Le lesioni di gravità crescente sono state
associate a scoperta di pseudocyts in questi organi. Mentre 45 animali sieronegativi
erano liberi da lesioni o da micro-organisms di cervello e rene, la nefrite
focale interstiziale è stata rilevata nei restanti sette.
Introduzione
Encephalitozoon cuniculi (E. cuniculi) è un microsporidian protozoa
che infetta una larga varietà di animali da laboratorio e animali domestici.
It causes specific tissue reactions having granulomatous- nonpurulent characteristics
in various organs or tissues, especially the brain and kidney (1, 2). Lagomorph
encephalitozoonosis, che è la più comune, è generalmente
caratterizzata da deboli non cliniche infezioni, la cui scoperta dipende da
procedure diagnostiche che includono esami serological, histological o parasitological.
A causa del tempo esteso (4-6 settimane) tra la risposta e l'occorrenza delle
lesioni serologic, gli esami histopathologic potrebbero dare risultati negativi
falsi (3). Diversi metodi fino ad oggi serodiagnostic, tra cui indirect immunofluorescence
(4, 5), skin test (6), complement fixation (7), enzyme immunoassay (8), dot
enzyme-linked immunosorbent assay (9) and carbon immunoassay-CIA (10), sono
stati utilizzati per rilevare l'encephalitozoonosis nei conigli. Di questi
le prove, CIA, il cui principio dipende dall'allegato di particelle di carbonio
alla parte Fc del coniglio immunoglobulin G (11), ha dimostrato di essere
sia sensibile che affidabile (10, 11). Benché numerosi studi post mortem
histopathologic di encephalitozoonosis sono stati riferiti in Turchia (12,
13), nessuno studio dettagliato è stato effettuato in particolare nella
popolazione di conigli. Lo studio attuale è stato progettato per documentare
la prevalenza di encephalitozoonosis in colonie di coniglio in provincia Elazig,
Turchia, utilizzando esami serological e pathomorphological per descrivere
la distribuzione delle lesioni.
Materiali
e metodi
Animals: A total of 150 rabbits (New Zealand white, colored or mrxed breeds,
of either sex) were randomly selected from 15 different rabbit colonies from
1996 to 1997 (Table- 1). Le loro età oscillavano da 14 a 48 settimane
ed esse erano clinicamente sane. Essi sono stati acquistati da allevatori
dilettanti e da strutture dipartimentali della Facoltà di Medicina
Veterinaria Dell'università Firat. Gli animali erano mantenuti in un
sistema di batterie chiuso (3 o 4 animali per gabbia).
Histopathology: All the animals, sacrified by cervical dislocation, were necropsied.
A campioni di sangue è stato permesso di coagularsi e il siero è
stato separato. Campioni di tessuto rappresentativi da organi principali tra
cui rene, cervello, cuore, fegato di polmone, ghiandole adrenal e parte piccola
e i grandi intestini erano fissi in formalin e trattato come di solito. Tissue
sections about 5p,m thick were stained with hematoxylin and eosin (H&E),
van Gieson (vG), Gomori's or Grocot's methanamine silver nitrate (GMS), and
Brown and Brenn (B&B) staining methods were also used on selected sections
(14). La presenza o l'assenza di lesioni specifiche è stato giudicata
esaminando almeno due sezioni separate di ogni rene, corteccia e medulla comprendenti
e l'emisfero cerebrale ( due sezioni sagittal di spessore 2 mm dai i lati
del midsagittal plane), e cervelletto. Each tissue size was about 2-2.5 cm2.
Diagnosi Histopathologic, considerata in conformità con un protocollo
utilizzato da Pakes et al. (6)È stato giudicato positivo quando il
protozoa è stato rilevato e (o) almeno un granuloma è stato
visto o perivascular cuffing e gliosis è stato osservato nel cervello.
Sera and Serologic test: sera were kept at -20 C until tested. L'equipaggiamento
di prova era un regalo generoso dal Dott. T. Muratore, laboratorio Testman,
Uppsala, Svezia. La procedura è stata eseguita come descritta precedentemente
(10). In breve, serum was diluted in phosphate buffer saline (PBS) in the
ratio of 1/20. Il siero diluito era misto con una quantità uguale di
sospensione di antigene ( 10 p.l ) e si è sviluppato per 5 minuti a
temperatura ambiente. La sospensione serum-antigen ( 10 pl ) era misto con
sospensione di carbonio ( 10 pl ) su una diapositiva di microscopio. Dopo
avere applicato un coverglass, le diapositive sono state esaminate in un microscopio
leggero sotto immersione di olio. In risultati positivi, le spore erano nero
o grigio tinto.
Risultati
Serologic studia: I risultati sono presentati nella tabella 1. In breve, la
percentuale di animali sieropositivi è variata molto tra colonie e
oscillata da 40% al 90%. La seropositivity generale era del65.33%.
Scoperte Macroscopiche: Il rene era l'unico organo che si trovava che aveva
cambiamenti evidenti. Out of 150 rabbits, 22 had focal or multifocal depressions
on the external surface of the kidney (Figure 1). Questi cambiamenti erano
bilaterali, grayish-white, e lievi o moderati ma essi sono divenuti più
evidenti dopo formalin-fixation. On removal of the capsule, there was no parenchymal
tearing. Tutti questi conigli erano sieropositivi.
Extrarenal and unrelated lesions included subacute or chronic coccidiosis
associated-cholangiohepatitis (19 cases), striations in the aorta (1 case),
focal necrotic appendicitis and cecocolitis (2 cases) and patchy consolidations
in the lung (52 cases).
Scoperte microscopiche : I cambiamenti microscopici negli animali sieropositivi
come mostrato nella tabella 2 erano molto frequenti nel rene (38 casi, il
25.33%), in cervello (32 casi, il 21.33%), meninges (9 casi, il 6%) e il cuore
(4 casi, il 2.67%). Kidney lesions were characterized by mild to moderate
chronic nonpurulent interstiziale nephritis. interstiziale lymphoid infiltrates
were either local or diffuse and contained discrete necrotic tubular epithelium.
Essi sono stati visti sia nella corteccia che nel medulla, benché fossero
la maggior parte di comune nel papi11a renalis. Varying degrees of interstiziale
fibrosis with generally scanty mature collagen accompanied by variable dilation
of the collecting tubules and loop of Henle were seen in the cortex. In 8
animali, strutture, compatibili con E. cuniculi pseudocysts e (o) sporozoites,
è stato visto in cellule tubolari renali o lumen tubolari senza reazione
nel tessuto; tuttavia, le lesioni hanno propeso a essere diffuse in questi
reni. In 7 animali sieronegativi; la nefrite lieve interstizialee è
stata riconosciuta da infiltrazioni di cellula lymphoid e scarso collagenous
tessuto.
Focale o l'encefalite multifocal granulomatous è stata osservata in
32 conigli. Mild to moderate perivascular mononuclear cell cuffs and (or)
glial nodules were seen, particularly in the vicinity of granulomas (Figure
2).
Small discrete microgranulomas consisting of macrophages, lymphocytes and
glial cells erano sparse casualmente sebbene molto spesso nella corteccia
cerebrale e la maggior parte di loro non ha avuto alcuna forma visibile nel
centro. Queste lesioni sono state più diffuse e gravi in conigli il
cui cervello ha contenuto singolo o multiplo pseudocysts. Moderate to extensive
meningitis distinguished by infiltration of lymphocytes, plasma cells and
macrophages è stato osservato anche nei conigli con pseudocysts nell'assenza
di qualsiasi reazione del tessuto. In alcuni conigli, è stato visto
ependymitis. Quattro animali sieropositivi con lesioni al cervello e (o) lesioni
al rene hanno anche mostrato separazione delle fibre di muscolo di cuore dalla
cellula focale o diffusa mononuclear infiltration.
Although mononuclear inflammatory foci consisting of granuloma-like aggregates
were seen within the hepatic parenchyma near the portal track and even granulomas
with giant cells in 12 seropositive rabbits, these lesions have not been regarded
as encephalitozoon-associated as all these animals also had lesions of active
hepatic coccidiosis. Allo stesso modo, le reazioni infiammatorie periportal
sono state viste in 69 animali sieropositivi e 35 animali sieronegativi. A
parte in due casi, tutti i conigli con hepatic coccidiosis erano serologically
diagnosticati come affetti da encephalitozoonosis.
Discussione
Ci sono stati molti rapporti che documentano l'alta prevalenza di encephalitozoonosis
in conigli in tutto il mondo utilizzando la prova CIA (i 26%, i 32%, il 35%,
il 75%), test della pelle (il 45%), prova di anticorpo fluorescente indiretta
(il 28%, il 54%), il consolidamento di complemento (il 24%), enzima immunoassay
(il 50%) e analisi enzyme-linked immunosorbent (il 45%) (4-9, 11, 12, 1517).
[ There have been many reports documenting the high prevalance of encephalitozoonosis
in rabbits throughout the world using the CIA test (26%, 32%, 35%, 75%), skin
test (45%), indirect fluorescent antibody test (28%, 54%), complement fixation
(24%), enzyme immunoassay (50%), and dot enzyme-linked immunosorbent assay
(45%) (4-9, 11, 12, 15- 17).] Nello studio attuale, una sieroprevalenza allo
stesso modo alta (il 65.33%) concorda con questi rapporti.
E' interessante fare congetture su come la prevalenza di infezione può
essere coerentemente alta in tutti gli studi e gli animali ancora sieronegativi
possono persistere malgrado esposizione a una tale alta e continua sfida.
È stabilito bene (19) che i conigli adulti sia domestici che selvaggi
possono essere infettati da trasmissione orale con solo 50 cultura di tessuto
infettivo, e che quella trasmissione può essere effettuata anche solo
con amministrazione intratracheal (3). Gli studi precedenti su trasmissione
di infezione in una colonia di allevamento(5), aveva mostrato che di solito
i conigli giovani sono diventati sieropositivi nelle loro prime poche settimane
di vita e si è richiesto quindi che la trasmissione di infezione si
fosse verificata quasi immediatamente dopo il parto o in utero. Numerose altre
osservazioni in questo documento meritano considerazione. Two does seroconverted
during the study showing that conditions did exist for adult-adult transmission.
Prior to seroconversion, as with all seronegative does, all offspring of these
two does were seronegative. Tuttavia dopo seroconversion, il 70% (19 di 27)
della loro prole era sieropositivo, a percentage which was higher than that
for the offspring of does which were seropositive throughout the study (27%
or 40 of 150). Le summenzionate osservazioni, dovrebbero essere valutate insieme
alle osservazioni di Wilson (20) che mostrano in studi su conigli experimentally-infected
che le uninfected litters potrebbero essere ottenute da operazione cesarea,
implicando che la trasmissione verticale non si è verificata. Sembrerebbe
così che i conigli appena nati siano estremamente suscettibili a infezione
benché la via di infezione non possa essere accertata (cioè,
se orale, respiratoria o entrambe). Inoltre, gli adulti newly-infected espellono
un numero più grande di organismi (3), perciò sembrerebbe che
l'infezione sia in gran parte se non esclusivamente determinata da dose di
esposizione e che non ci sia alcun fattore genetico che predispone a infezione.
In most breeding colonies, the majority of infected does would be expected
to be chronically infected and therefore excrete E. cuniculi only sporadically.
In queste circostanze, meno di mezza della loro prole si infetta mantenendo
così la prevalenza di infezione come osservata. Nei conigli selvaggi,
il tasso di infezione non è così alto (21, 22). Anche in conigli
che sono stati stati molto probabilmente infettati nella prigionia e rilasciati
nella natura, l'infezione non persiste. La spiegazione proposta per questo
è che nella natura gli animali non sono reinfettati con il parassita
che essi espellono (21). Questa ipotesi conta sull'ipotesi che in colonie
di coniglio chiuse il riciclaggio di parassita sia responsabile di persistenza.
La persistenza potrebbe anche essere il risultato della virulenza debole del
parassita. Poiché l'infezione non forza pressione selettiva sulla popolazione
ospite, è anche probabile che il parassita e l'ospite raggiungano un
bilancio nelle colonie di conigli.
Le lesioni di rene grossolane nella gravità variabile sono state rilevate
solo in animali sieropositivi ma non sieronegativi, perciò sembrava
che questo fosse specifico per l'infezione come riferita dai molti autori
(1, 13, 18). Con l'eccezione della nefrite focale dolce interstizialee rilevata
in 7 casi sieronegativi, le lesioni microscopiche e la scoperta di organismi
sono stati correlati bene con i dati sierologici. Questo è coerente
con la scoperta di 2 casi di nefrite interstiziale negli animali sieronegativi
(4). Questo risultato indica che la diagnosi pathomorphologic che dipendeva
solo da nefrite debole interstiziale potrebbe essere ingannevole. Di conseguenza,
i criteri diagnostici proposti da Pakes (6, 11) erano utili nell'evitare risultati
positivi falsi. A causa della distribuzione sparpagliata delle lesioni e del
ritardo tra risposta e aspetto sierologico delle lesioni, la diagnosi pathomorphologic
è incline a risultati negativi falsi. Per minimizzare il pericolo di
una conclusione negativa falsa, sono state esaminate tante sezioni di tessuto
quanto si è potuto. Tuttavia la possibilità non ha potuto essere
esclusa totalmente. L'alta seropositivity e frequenza di lesioni hanno mostrato
ancora una volta che i conigli non dovrebbero essere utilizzati come animali
sperimentali dove esami histopathologic sono un punto terminale, a meno che
appropriate precauzioni non siano state prese per stabilire che una colonia
non è infetta, o almeno fare una selezione per scegliere individui
sieronegativi per tali studi. L'aumento nella gravità e nella distribuzione
delle lesioni è stato associato alla presenza di pseudocysts in questi
organi, tuttavia nessuna reazione infiammatoria è stata rilevata intorno
al pseudocysts. Questa osservazione sarebbe attesa se nessun antigene straniero
fosse esposto al sistema immune ospite cioè, tutti gli antigeni sono
stati mantenuti all'interno del pseudocyst.
In conclusione, i risultati di questo studio indicano che le colonie di coniglio
utilizzate in esperimenti biomedici dovrebbero essere per routine rilevate,
per evidenziare che la presenza di infezione di encephalitozoon assicuri la
produzione di dati affidabili per esperimenti biomedici. I risultati Sierologici
sono stati correlati bene con lesioni macroscopiche nel rene e lesioni di
cervello microscopiche. Benché gli esami histopathologic soli potessero
dare risultati positivi falsi negativi o uniformi falsi, la CIA è stato
mostrata essere una prova affidabile e semplice.
Riconoscimenti
Gli autori ringraziano sinceramente il Dott. J. Cox, CSL Limited, Victoria,
Australia, for critical reading and Dr. T. Waller, Testman Laboratories, Uppsala,
Sweden for kindly supplying carbonimmunoassay test kit.
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P.O Box 22, 43100 Raanana ISRAEL.
Tel. 972-9-7419929 Fax. 972-9-7431778
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Markovic - President
D. Yakir- Secretary
B Tcebn - Treasurer